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ELISA試劑盒試驗步驟詳解
點擊次數：2630 發布時間：2017-12-08
ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體，ELISA試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測。因為其試劑不亂、易保留，操縱簡便，結果判定較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢修的各領域中。
ELISA試劑盒試驗步驟詳解
1、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在上海恒遠生物白介素ELISA試劑盒酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3、配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
4、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
5、溫育：操作同3。
6、洗滌：操作同5。
7、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
10、計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
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